Experimente Craiova - 2010
Experimente Craiova
Experiment 1 : (celule tumorale)
Locatie : Craiova.
Distanta de actiune : 3000 km .
Obiect : 4 flacoane continand celule tumorale.
Metoda de comparatie : proba martor
Timp de actiune : 9 minute si 30 secunde.
Proportia distrugerii : 40-95 %, in conditiile in care celulele tumorale ale probei martor aflate in apropiere au fost distruse. (comparatia s-a facut folosind drept proba martor cel mai putin afectat flacon).
Observatii :
- celulele tumorale neafectate nu au mai proliferat ulterior actiunii
- proba martor aflata in incubator la distanta de 10 cm de celelalte flacoane a fost afectata in proportie mare.
- Alte 11 flacoane continand celule tumorale, aflate pe alt raft alaturat au fost afectate la randul lor in proportie de 40-95 %.
Concluzii : Datorita faptului ca proba martor a fost afectata nu a fost posibil redactarea unui raport .
Experiment 2 : (HIV)
Locatie : Craiova.
Distanta de actiune : 3000 km .
Obiect : 8 flacoane continand celule infestate cu HIV
Metoda de comparatie : 2 probe martor
Timp de actiune : 8 minute.
Proportia distrugerii : 7% - 8.5 % la toate cele 8 flacoane.
Aparatura de masurare : aparat Elysa-Elisei .
Observatii :
- au fost distruse leucocite infestate cu HIV
- proba martor aflata la distanta de 100 m de celelalte flacoane
Raportul experimentului nu a fost publicat.
Experiment 3 - Celule tumorale - Craiova - Romania
Linie celulara : MDA-MB-231.
- insamantarea celulelor in cutiute Petri cu diametrul de 6 cm; echipamentul folosit a fost un incubator Sanyo cu dioxid de carbon, iar durata incubarii de 72 ore pana in momentul experimentului, interval in care celulelor au ajuns la o confluenta de circa 75%.
- numarul de cutii Petri incubate a fost de 5 (4 pentru experiment, 1 pentru martor).
- mediul de cultura utilizat a fost DMEM + L-glutamina + aminoacizi non-esentiali + vitamine + antibiotice + piruvat + ser fetal de vitel 5%
- cutiile Petri au fost verificate zilnic la microscopul inversat pentru aprecierea ritmului de dezvoltare
- cu 5 minute inainte de experiment, toate cele 5 flacoane de cultura au fost scoase din incubator, iar martorul a fost plasat intr-un alt laborator, aflat la distanta.
- durata mentinerii flacoanelor in afara incubatorului a fost de circa 25 minute (incluzand intervalul in care a actionat Dl. Nuteanu).
- evaluarea rezultatelor s-a facut la aproximativ 20 de ore de la experiment.
- mediul de cultura a fost indepartat, iar suportul de cultura a fost spalat cu PBS de 2 ori
- celulele au fost desprinse prin tripsinizare (1 ml tripsina, aproximativ 3 minute, insotita de agitarea flaconului); tripsina a fost apoi rapid neutralizata prin adaugarea a 9 ml mediu de cultura
- intr-un tub Eppendorf s-au adaugat 100 microlitri reactiv Promega (adus la temperatura camerei) si 100 microlitri suspensie celulara din fiecare flacon de cultura.
- amestecul s-a vortexat energic timp de 2 minute pentru liza celulara.
- rezultatul (exprimat in unitati RLU) a fost determinat pentru fiecare proba in parte cu ajutorul Glomax-ului (conform protocolului atasat).
- in final s-au exprimat rezultatele procentual, in functie de proba martor:
I: 7,88%
II: 17, 90%
III: 14,32%
IV: 29,88%
Cateva discutii:
Ce a diferit fata de primul experiment:
- mediul de cultura (desi cu acceasi compozitie finala) a fost dintr-un lot nou, preparat inaintea incubarii; aproape toate componentele (vitamine, etc.), cu exceptia piruvatului si serului de vitel, au fost din alte loturi.
- flacoanele de cultura au fost de aceasta data cutii Petri si nu flask-uri cu filtru
- nu am masurat activitatea metabolica a martorului inaintea experimentului, l-am considerat pur si simplu etalon; oricum, aspectul sau nu era modificat in privinta morfologiei si gradului de atasare a celulelor
- nu am masurat activitatea metabolica a celulelor in urma unei expuneri de 25 - 30 minute in mediul extern incubatorului (teoretic nu se modifica)
Concluzii:
In urma experimentului din data de 23 aprilie 2010 efectuat conform protocolului prezentat, se poate concluziona ca activitatea metabolica a celulelor a fost diminuata intr-un procent cuprins intre 7 si 29%. Aceasta scadere a activitatii metabolice este direct proportionala cu viabilitatea celulara. Avand in vedere echipamentele si tehnica folosita, nu putem face comentarii privitoare la moartea celulara (apoptoza sau necroza), eventualele mecanisme care au dus la acest efect urmand sa faca obiectul unor studii ulterioare.
Nu am publicat deocamdata acest raport in reviste de specialitate pentru ca nu avem in dotare un flawcitometru care sa ne ajute sa aflam informatii suplimentare referitoare la moartea celulara.
Răspunde cu citat
Marcaje